什么是細菌內毒素定量檢測光度測定法？

　　細菌內毒素定量檢測之光度測定法試驗應在特定的儀器中進(jìn)行，溫度一般為37℃±1℃。為保證濁度和顯色試驗的有效性，應預先進(jìn)行標準曲線(xiàn)的可靠性試驗以及供試品溶液的干擾試驗。當試驗環(huán)境中發(fā)生了任何可能影響檢測結果的改變時(shí)，試驗的有效性應重新檢測。

　　
 

　　1、標準曲線(xiàn)的制備

　　

　　用標準內毒素配成溶液并制成至少3個(gè)濃度的稀釋液(稀釋度不得大于10)，低濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。每一稀釋步驟的混勻時(shí)間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時(shí)要求做2支陰性對照。當陰性對照在設定的時(shí)間內不發(fā)生反應，將全部數據進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析。根據線(xiàn)性回歸分析，標準曲線(xiàn)的相關(guān)系數(r)的絕對值應該大于或等于0.980.試驗方有效。否則須重新試驗。

　　

　　2、細菌內毒素定量檢測之光度測定法：

　　

　　按“光度法的干擾試驗”中的操作步驟進(jìn)行檢測。使用溶液C生成的標準曲線(xiàn)來(lái)計算溶液A的每一平行管的內毒素濃度。選擇標準線(xiàn)中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內毒素濃度。制備溶液A、B、C和D。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時(shí)間等，參照所用儀器和試劑的有關(guān)說(shuō)明進(jìn)行。每種溶液至少做2個(gè)平行管。

　　

　　細菌內毒素定量檢測試驗須符合以下三個(gè)條件方為有效：

　　

　?。?）系列溶液C的結果要符合“光度技術(shù)預試驗”下“標準曲線(xiàn)的可靠性試驗”中的要求。

　　

　?。?）用溶液B中的內毒素濃度減去溶液A中的內毒素濃度后，計算出的內毒素的回收率要在50%-200%的范圍內。

　　

　?。?）溶液D(陰性對照)在規定的反應時(shí)間內未檢測出內毒素。

　　

　　若供試品溶液所在平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數和濃度后，小于規定的內毒素限值，判供試品符合規定。若大于規定的內毒素限值，判供試品不符合規定。