持續低含量?jì)榷舅氐膯?wèn)題

在純化的最后階段，目標是蛋白質(zhì)的濃度為克每升水平，同時(shí)內毒素的濃度為微克每升左右，這種情況常常會(huì )類(lèi)似于大海撈針一樣的勞而無(wú)獲。

檢測這些低濃度的內毒素也是一個(gè)問(wèn)題，往往很難在納克每升水平應用一般的常規方法直接檢測出來(lái)。據許多尚未正式報道的資料表明，許多檢測到的成分起先被認為是致熱性的新物質(zhì)，后來(lái)證實(shí)這些物質(zhì)的致熱活性的來(lái)源并不是這種物質(zhì)本身而是內毒素。這是由于檢測技術(shù)的不敏感所造成的，所以要完-全清除內毒素顯然是不可能的。

用來(lái)檢測內毒素的生化試驗有兔試驗、鱟試驗，雞胚致死性試驗和半乳糖氨預處理小鼠致死性試驗等。其中，鱟試驗(LAL)是最為敏感和經(jīng)濟的一種檢測方法。LAL試驗由Renrson于1985年創(chuàng )立，其原理是利用一種稱(chēng)為鱟的海洋節肢動(dòng)物的血凝集系統。運用這種方法在體外可檢測出0.02EU/ml水平的內毒素。雖然LAL試驗被認為是檢測內毒素的敏感而可靠的方法，但是許多物質(zhì)也會(huì )干擾凝聚過(guò)程而導致假陽(yáng)性或假陰性結果。這些干擾通常與樣品的濃度有關(guān)，如果將所檢測的樣品溶解可以避免干擾，但是這樣又會(huì )降低試驗的敏感性。當然，有的時(shí)候對于一些復雜的液體如血液、陽(yáng)離子蛋白質(zhì)溶液和脂質(zhì)體包被的內毒素等檢測也會(huì )偶爾失效。因此，尋找一種可行的、敏感的生化試驗需要進(jìn)一步的研究，全血刺激試驗是新近發(fā)展起來(lái)的一種檢測內毒素的試驗﹐目前尚在德國進(jìn)行有關(guān)方面的驗證。