產(chǎn)物純化清除內毒素

產(chǎn)物的純化可以有效地去除內毒素﹐常用的純化流程由幾個(gè)層析步驟組成，包括離子交換、疏水相互作用層析和凝膠過(guò)濾色譜法。一般來(lái)說(shuō)，起初，高內毒素含量的產(chǎn)物通過(guò)上述過(guò)程的純化而不再經(jīng)別的特殊處理就能將內毒素減少至100EU/ml左右，甚至更低。如重組α1-抗-胰-蛋-白-酶在粗制的細胞勻漿中濃度為1.2×107EU/ml，當采用超濾﹑離子交換和固定的金屬螯合物吸附層析法三步純化后，終產(chǎn)物中的內毒素含量小于0.22 EU/ml。

另外，雖然有幾種吸附步驟的混合使用，但在最終產(chǎn)物中仍有相當量的內毒素未能被清除。雖然在通過(guò)陽(yáng)離子交換和肝素吸附劑等無(wú)菌層析后，蛋白質(zhì)的純化度可達到99%以上，但是最終產(chǎn)物中的內毒素含量仍有14EU/ml。再如，在純化的鼠IgG1預備物（PI=5.5）中微生物污染是很少的，經(jīng)過(guò)立即無(wú)菌過(guò)濾后，內毒素和 IgG1分別為100EU/ml和3EU/ml。此時(shí)再用其他方法（包括離子交換、疏水相互作用和蛋白質(zhì)A親和層析）再處理此IgG1溶液并未能進(jìn)一步去除所含的內毒素。同樣，當多黏菌素B或組胺酸用作層析柱時(shí)，在大劑量的樣品情況下，不能有效地將內毒素減少到一個(gè)理想的限度以下。而在處理少量的樣品時(shí)則可以一定程度地減少內毒素，但問(wèn)題是會(huì )丟失相對大量的產(chǎn)物。

蛋白質(zhì)和內毒素分子的特性對于蛋白質(zhì)和內毒素的進(jìn)一步減少有獨-特的影響。如針對堿性纖維母細胞生長(cháng)因子（bFGF）的內毒素選擇性吸附劑是以聚乙胺葡聚糖為基礎的，能成功地在負性層析模型中進(jìn)行。當內毒素被吸附的同時(shí)，bFGF的殘留可以避免。對IgG1來(lái)說(shuō)，只有特殊的內毒素選擇性吸附劑是成功的。

在制藥工業(yè)上有一些可選擇的方法可以得到低內毒素含量的產(chǎn)物，這些方法之間的差異表現在內毒素清除時(shí)魚(yú)和熊掌不能兼得的問(wèn)題。因為藥用性蛋白質(zhì)的酸堿性不同，在制造過(guò)程中需要的合適環(huán)境也不同，所以不能采用完-全相同的方法來(lái)去除其中的內毒素。例如，離子交換層析對尿-激-酶或bFGF等堿性蛋白質(zhì)的去污染有用，而對酸性蛋白質(zhì)則因為吸附因素的作用將會(huì )同時(shí)伴有產(chǎn)物的丟失。小分子蛋白質(zhì)如肌球蛋白（相對分子質(zhì)量為18000）可用于超濾法去除大的內毒素聚合物，而對大分子蛋白質(zhì)如免疫球蛋白（相對分子質(zhì)量為150000）來(lái)說(shuō)，超濾則不起作用。此外，如果內毒素和蛋白質(zhì)的相互作用使內毒素單體通過(guò)細胞膜滲透到蛋白質(zhì)中，則此時(shí)超濾也是無(wú)效的。

由于產(chǎn)物多種多樣，人們期望用一個(gè)統一適用的內毒素清除方法是不切實(shí)際的。另一方面，由于所采用技術(shù)的不同也說(shuō)明，在純化步驟的改進(jìn)時(shí)，內毒素分子的特殊性質(zhì)并不總是被完-全考慮到的。