細菌內毒素檢查法中凝膠法在藥品中的正確使用方法

細菌內毒素作為外源性致熱原的內毒素能激活中性粒細胞等，是革蘭陰性菌細胞壁個(gè)層上的*結構，會(huì )使中性粒細胞釋放一種叫內源性熱原質(zhì)的物質(zhì)，其在體溫調節的中樞會(huì )引起發(fā)熱反應。當內毒素經(jīng)消化道進(jìn)入人體不會(huì )產(chǎn)生危害，但內毒素經(jīng)注射液等方式進(jìn)入血液時(shí)則引起癥狀不同的疾病。因此，藥品安全性檢驗一個(gè)重要項目就是藥品注射劑中細菌內毒素檢查。美國科學(xué)家Levin和Bang1968年建立鱟試驗法來(lái)檢查細菌內毒素，美國FDA于1973年制定的規則指出“鱟試劑是一種檢測細菌內毒素的靈敏指示劑。"

1.鱟試劑的特性及與內毒素產(chǎn)生反應的作用機理

鱟試劑是細菌內毒素檢查法中最重要的試劑。它是鱟科血細胞（變形細胞）裂解液的凍干產(chǎn)物。鱟的血液中只有一種類(lèi)型的血細胞參與循環(huán)就是被稱(chēng)為變形細胞。目前制備細胞鱟試劑一種是東方鱟，另一種是美洲鱟。研究鱟試劑作用機理表明，細菌內毒素激活鱟試劑中鱟血細胞溶解物，產(chǎn)生一系列的凝集酶反應，形成凝固蛋白凝膠。判斷供試品中細菌內毒素的限-量能否在規定范圍，可通過(guò)用鱟試劑檢測，或者是量化革蘭陰性菌所產(chǎn)生細菌內毒素。

2.細菌內毒素檢查法

2.1內毒素標準品

細菌內毒素國家標準菌株由大腸桿菌提煉精制而成，是用來(lái)檢查，校準，仲裁鱟試劑靈敏度、細菌內毒素濃度測定，干擾測試和測試方案中供試品陽(yáng)性對照和陽(yáng)性對照溶液的制備和光度測定方法的可靠性測試、凝膠檢查鱟試劑試驗敏感性。國家標準是細菌內毒素校準的參照標準，單位為內毒素（EU），1EU等于1國際單位內毒素（IU）。

2.2實(shí)驗準備

玻璃器皿在酪酸洗液、其他熱源性滅活劑、或清洗劑將充分浸泡，控干洗液后用蒸餾水3遍以上的沖洗，放入干燥箱，在250℃干烤30min以上，用以除掉可能性存在外源性?xún)榷舅馗蓴_。如果用塑料的器具，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應選用標明無(wú)內毒素并且對試驗無(wú)干擾的器具。

無(wú)熱原酶標板

2.3鱟試劑靈敏度復核

將細菌內毒素采樣標準品與專(zhuān)門(mén)的檢查水在渦流攪拌器中混合溶解15min，稀釋后測定鱟試劑的靈敏度值（λc）。每一批新批次鱟試劑全部需嚴格采用靈敏度試驗。

2.4實(shí)驗方法

將8支鱟試劑分別加入細菌內毒素檢查用0.1mL水溶解。按最大稀釋倍數稀釋的供試品溶液0.1mL加入2支，作為供試品溶液管，2支加入含內毒素濃度為2λ對照溶液為供試品陽(yáng)性對照管，2支加入2λ內毒素工作標準品溶液0.1mL作為陽(yáng)性對照管，2支加入細菌內毒素檢查用水0.1mL作為陰性對照管。試管混勻封口置于37C±1℃恒溫器中保溫60分鐘±2分鐘，從恒溫器中慢慢取出，極緩的倒轉180°，若未形成凝膠，或者形成凝膠不堅實(shí)、變形體從管壁下滑脫落為陰性；管內出現凝膠并且凝膠不變形、如果不從管壁下滑脫落即為陽(yáng)性。拿取或者保溫試管時(shí)要避免振動(dòng)，以免出現假陰性檢測結果。

細菌內毒素工作標準品

2.5實(shí)驗注意事項

準備工作：肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒。應在清潔環(huán)境中進(jìn)行操作，取樣時(shí)防止混入氣體，并防止微生物污染移液管。