細菌內毒素檢查法中凝膠法在藥品中造成異常結果的原因和解決方法

凝膠法實(shí)驗過(guò)程時(shí)間短，消耗樣品量少，且具有使用設備簡(jiǎn)單，費用低等優(yōu)點(diǎn)，作為《中國藥典》“仲裁"檢查方法，廣泛用于注射劑藥品細菌內毒素檢查。

1.干擾試驗的必要性

鱟試劑凝集反應是一種二價(jià)陽(yáng)離子酶反應體系，有許多干擾反應的物質(zhì)會(huì )干擾凝膠的形成。在新樣品測定中，必須首先進(jìn)行細菌內毒素干擾試驗，確定是否存在干擾樣品出現縮合反應的因素。為了保證所選處理方案能夠在不滅活內毒素情況下有效消除干擾，采用預先添加的標準內毒素再處理液進(jìn)行干擾試驗。

2.可能會(huì )出現的異常結果及其原因和解決方法

2.1造成呈假陰性的可能原因及解決方法

原因可能是：①內毒素工作標準中存在的一些問(wèn)題，如滴度標注不準確，過(guò)期或貯存不當導致失效，稀釋誤差或稀釋振蕩不夠，對照管沒(méi)有達到2λ陽(yáng)性?xún)榷舅貪舛?/span>；②問(wèn)題出在鱟試劑。例如，過(guò)期失效，振蕩不當，靈敏度標注不準確，會(huì )產(chǎn)生氣泡，鱟試劑酶蛋白變性，鱟試劑破壞；③溫控器溫度不符合要求或保溫時(shí)間不夠。

解決辦法包括：規范內毒素標準效價(jià)的審查和鱟試劑在保質(zhì)期正確儲存和使用的敏感性；內毒素稀釋?xiě)獪蚀_，確保PC管添加2λ內毒素；當使用可溶解的鱟試劑時(shí)，沿著(zhù)管壁慢慢加水，讓混合器振蕩30s。避免劇烈振動(dòng)產(chǎn)生氣泡，確保恒溫器溫度和保溫時(shí)間正確。

2.2造成假陽(yáng)性的可能原因及解決方法

原因可能包括：實(shí)驗設備受到污染，經(jīng)熱原、外源性?xún)榷舅鼗蛭⑸镂廴静荒?滅活；試驗中由于誤操作造成的內毒素污染；BET水不符合要求，內毒素超標，培養溫度不正確等。解決方案包括：按照2015年版《中國藥典》的規定對實(shí)驗儀器進(jìn)行處理；選擇合格的BET水，確保正確的培養溫度、時(shí)間和操作。

總而言之，細菌內毒素檢查法已被列入許多國家藥典。方法學(xué)研究表明，用細菌內毒素法取代家兔熱原法的藥物種類(lèi)較多，因為它比家兔熱原法更精準、快速、簡(jiǎn)捷、經(jīng)濟、容易推廣等諸多優(yōu)點(diǎn)。