細菌內毒素定量光度測定法操作規程與有效性評估指南

一、概述

細菌內毒素檢查法（定量檢測）之光度測定法是一種利用光譜分析技術(shù)來(lái)測定樣品中細菌內毒素含量的方法。此方法依賴(lài)于鱟試劑（一種從鱟的血液中提取的生物試劑，對細菌內毒素高度敏感）與內毒素反應產(chǎn)生的濁度變化，通過(guò)比色法量化內毒素水平。

二、標準曲線(xiàn)的制備

材料準備：用標準內毒素配成溶液，并制成至少3個(gè)不同濃度的稀釋液，稀釋度不得大于10，濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。

試驗設置：每一稀釋步驟的混勻時(shí)間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時(shí)設置2支陰性對照。

數據分析：當陰性對照在設定的時(shí)間內不發(fā)生反應時(shí)，對全部數據進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析。標準曲線(xiàn)的相關(guān)系數(r)的絕對值應大于或等于0.980，否則需重新試驗。

三、光度測定法操作步驟

溶液準備：選擇標準線(xiàn)中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內毒素濃度，制備溶液A、B、C和D。

加樣與保溫：參照所用儀器和試劑的有關(guān)說(shuō)明，確定供試品和鱟試劑的加樣量、比例以及保溫時(shí)間。每種溶液至少做2個(gè)平行管。

檢測與計算：使用溶液C生成的標準曲線(xiàn)來(lái)計算溶液A的每一平行管的內毒素濃度。通過(guò)溶液B和A的濃度差計算內毒素的回收率，確保其在50%-200%的范圍內。

四、試驗有效性判定

標準曲線(xiàn)可靠性：系列溶液C的結果需符合標準曲線(xiàn)的可靠性試驗要求。

回收率：用溶液B中的內毒素濃度減去溶液A中的內毒素濃度后，計算出的內毒素的回收率應在50%-200%的范圍內。

陰性對照：溶液D（陰性對照）在規定的反應時(shí)間內未檢測出內毒素。

供試品判定：若供試品溶液所在平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數和濃度后，小于規定的內毒素限值，則判供試品符合規定；若大于規定的內毒素限值，則判供試品不符合規定。

五、注意事項

嚴格遵守實(shí)驗室操作規范，確保試驗環(huán)境的潔凈和穩定。

使用經(jīng)細菌內毒素試驗驗證合格的無(wú)熱原器具，以減少干擾和誤差。

遵循所有關(guān)于內毒素旋渦震蕩次數的建議，確保試驗的準確性和可靠性。

定期對儀器進(jìn)行維護和校準，以保證其性能的穩定和準確。

這種方法是藥品、醫療器械及生物制品安全性評估中重要的一部分，確保產(chǎn)品無(wú)細菌內毒素污染，保障患者安全。