既然內毒素可以引起組織因子途徑啟動(dòng),那么內毒素究竟誘導哪些細胞表達TF引起血管內凝血呢?
根據TF合成情況,體內細胞可分為三類(lèi):
①固有性表達TF細胞,如腦部星狀膠質(zhì)細胞,胎盤(pán)滋養層細胞等TF固有性表達極為豐富;其他大部分組織細胞如血管平滑肌細胞﹑成纖維細胞等也有TF的固有性表達,尤以血管外膜、器官包膜、皮膚表皮及黏膜等處相當豐富,它們猶如袖套狀圍繞血管與被套狀包繞器官,在體內構成一個(gè)分布廣泛的止血屏障。
②不表達TF的細胞,如淋巴細胞、血小板、紅細胞等。
③誘生性表達TF的細胞,如血管內皮細胞、單核細胞、巨噬細胞等。一般認為固有性TF表達是以嵌膜蛋白形成存在,它主要與生理性止血有關(guān);誘生性表達可以嵌膜蛋白或小囊泡形式存在,它主要與病理條件下血栓形成有關(guān)。
現在普遍認為內毒素引起血管內凝血,這是由于它能誘導單核細胞與血管內皮細胞大量表達TF所致。
以往所謂組織凝血活酶,實(shí)質(zhì)上包括TF與磷脂兩部分,曾誤認為T(mén)F為脂蛋白?,F已明確TF是一個(gè)跨膜糖蛋白,又稱(chēng)CD142。成熟的TF為一單鏈跨膜蛋白,由263個(gè)氨基酸組成。按氨基酸組成計算分子量為2.96萬(wàn),按SDS-PAGE推算為4.2萬(wàn)~4.7萬(wàn),可能與膜外部分糖基化有關(guān)。膜外區由氨基酸殘基(AA)1~219組成,構成二個(gè)β折疊片呈V形排列??缒^由AA220~242組成。胞漿區由AA243~263組成。胞漿區通過(guò)硫酯鍵與鹽鍵,使TF錨定在胞膜上,胞漿尾在信號傳遞中起著(zhù)重要作用。
TF在功能上既是FⅦ與FⅦa的受體,又是FⅦa激活FⅩ和FⅨ的必需輔因子。FⅦ只有與TF結合才有可能被激活成為FⅦa ;FⅦa也只要與TF結合才能有效地激活FⅩ和FⅨ。這是由于在磷脂和Ca2+存在的條件下,TF與FⅦ喱或FⅦa以1∶1方式結合,一旦結合立即引起FⅦ和FⅦa發(fā)生構象變化,這種構象改變有利于FⅦ的活化及FⅦa充分發(fā)揮催化活性的緣故。
新近實(shí)驗表明TF是一個(gè)真正的受體,FⅦa 作為配體,FⅦa 與TF結合立即引起胞內信號轉導。從已有資料看來(lái),它主要是通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶途徑,上調多個(gè)基因表達(如Poly(A)聚合酶、尿激酶受體、TF等)。TF基因剔除可以導致小鼠在胚胎期死亡。這主要與卵黃囊血管生成和凝血障礙有關(guān)。
人的TF基因位于染色體1P21-22,全長(cháng)12.4kb,含6個(gè)外顯子,5個(gè)內含子。轉錄起始點(diǎn)距TATA盒26 bp。在TATA盒上游含有多個(gè)轉錄因子結合位點(diǎn),包括SP-1、EGR-1、AP-1,AP-2和NF-B。其中在單核細胞和血管內皮中涉及內毒素及細胞因子反應的轉錄因子最重要的是NF-κB。那么內毒素究竟是如何啟動(dòng)TF表達的?
目前多數學(xué)者認為內毒素首先與血漿中脂多糖結合蛋白結合,然后以復合物形式與CD14結合。CD14一般稱(chēng)為內毒素受體。實(shí)際上,單核/巨噬細胞表面的確含有較多的CD14,內毒素-脂多糖結合蛋白復合物(LPS-LBP)可以直接與CD14結合。但血管內皮細胞表面并無(wú)CD14,而是內毒素-脂多糖結合蛋白復合物與血漿中可溶性CD14結合,其后這個(gè)大復合物再與血管內皮細胞結合。
由于CD14并不是一個(gè)跨膜蛋白,它僅以糖磷脂酰肌醇形式錨定在細胞膜表面,本身不可能將內毒素信號轉導進(jìn)人細胞內,肯定還需通過(guò)其他跨膜蛋白。
新近發(fā)現單核/巨噬細胞和血管內皮細胞存在鐘樣受體(toll-like recepor,TLR),它們是跨膜蛋白。其中TLR2主要識別并結合革蘭陽(yáng)性細菌壁上的肽聚糖和脂蛋白,TLR4主要識別并結合內毒素-CD14復合物。從信號轉導角度考慮,可以認為T(mén)LR4才是內毒素的真正受體。
內毒素-CD14復合物與TLR4結合后,相繼通過(guò)髓樣細胞分化因子88(My88 )→白介素-1受體相關(guān)激酶(IRAK)→腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(TRAF)6-NF-κB誘導激酶(NIK)→抑制性NF-κB激酶(IKK)→NF-κB/Ⅰ-κB中的Ⅰ-κB磷酸化→NF-κB與Ⅰ-κB分離。于是NF-κB穿過(guò)核孔進(jìn)人核內,NF-κB(實(shí)際上是cRel和P65源二聚體)與TF基因DNA的結合部位結合,從而啟動(dòng)TF基因的轉錄(圖5-2)。其后TF mRNA相繼通過(guò)翻譯與隨后蛋白修飾,最后TF蛋白以跨膜形式存在或以小囊泡形式釋放。
應當強調指出:NF-κB是指由Rel蛋白家族成員以同源或異源二聚體組成的一組核轉錄因子。內毒素也引起其他基因轉錄,從而促進(jìn)許多蛋白表達,諸如急性期蛋白(如C-反應蛋白、血管緊張素原、α1-酸性糖蛋白、補體C3等)、細胞因子(如TNFα、IL-1β、IL1、IL-8等)黏附分子(如VCAM-1、ELAM1、ICAM等)以及單核細胞趨化蛋白(MCP)-1和纖溶醇原活化素抑制物(PAI)-1等等。
新近發(fā)現內毒素還可通過(guò)NF-κB途徑促進(jìn)血管內皮細胞TLR4和TLR2的表達。此外,內毒素誘導表達的細胞因子(TNFα、IL-6、IL-1等)又可通過(guò)NF-κB途徑促進(jìn)血管內皮細胞TF表達。因此,在內毒素引起TF表達過(guò)程中,可能通過(guò)多重正反饋方式而得到放大效應。
還應當看到:注入內毒素或大腸桿菌使微血管體系中單核細胞增加,在其TF表達明顯增加的同時(shí),血管內皮細胞表面TFPI和凝血酶調制素減少。這種促凝和抗凝活性之間的失衡,則可能促進(jìn)DIC的發(fā)生。