選擇性清除內毒素的方法：吸附技術(shù)之離子交換層析

吸附技術(shù)常被用于從蛋白質(zhì)溶液中清除內毒素，其原理基于活性炭或其他吸附材料的非選擇性吸附作用。這用于血漿的去污染是可能的。但是，如果也用非選擇性吸附劑來(lái)使蛋白質(zhì)溶液去污染則是不可行的，因為此時(shí)蛋白質(zhì)也會(huì )被活性炭不可逆地吸附掉。在醫用方面，去除50%的內毒素已被認為是相當成功的，此時(shí)很大一部分患者能生存下來(lái)，否則將死亡。相反，在生物技術(shù)中50%的清除率是絕對不夠的，應該將內毒素清除到接近最-低下限值。接下來(lái)介紹選擇性清除內毒素的方法：吸附技術(shù)之離子交換層析。

內毒素是帶負電荷的，采用離子交換法能將其從不含蛋白質(zhì)的溶液中吸附掉，如二乙烯氨乙烷（DEAE）色譜基質(zhì)、DEAE膜或帶四個(gè)氨基酸基團的功能性基質(zhì)。通過(guò)這種方法可以獲得超過(guò)5個(gè)規定量的清除因素，但是，這樣的有效去除效率只出現在高內毒素濃度情況下（LPS>1mg/L）。如果初始內毒素濃度≤<10μg/L（這是內毒素的一般污染水平），則3~4個(gè)規定量的減少是可行的。預先需要的最大吸附是初始的低離子力，與之相應的是濃度小于50mmol/L的NaCl溶液。

在酸性蛋白質(zhì)溶液的去污染，由于蛋白質(zhì)與內毒素競爭吸附劑的結合位點(diǎn)，使蛋白質(zhì)同時(shí)被吸附成為一個(gè)難以解決的問(wèn)題，所以?xún)榷舅氐臐舛韧ǔＲ_到超過(guò)吸附柱對蛋白質(zhì)的結合能力并使之耗盡的程度，常以DEAE吸附劑BSA作為典型的蛋白質(zhì)。從這一點(diǎn)來(lái)看，只有具有正電荷網(wǎng)的蛋白質(zhì)如堿性蛋白質(zhì)，適合于用離子交換法來(lái)處理，因為離子交換技術(shù)通常是負離子交換模式，從而使這些蛋白質(zhì)被拒于離子交換基質(zhì)之上.此時(shí)離子交換劑和帶正電荷的蛋白質(zhì)對內毒素的競爭也會(huì )發(fā)生，使出現沿層析柱分布的內毒素與堿性蛋白質(zhì)的線(xiàn)性積聚現象。

調節酸性蛋白質(zhì)的pH值使之達到或低于等電點(diǎn)是完-全可行的。這樣可中和或轉換蛋白質(zhì)的電荷以抑制其被吸附，從而阻止競爭，但這在等電點(diǎn)時(shí)對于溶解性好和穩定性好的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)則受到限制。一旦內毒素的正電荷網(wǎng)建立，內毒素就能跟堿性蛋白質(zhì)聚合。