內毒素在細胞內的解毒和清除中的內化案例介紹（二）

大多數學(xué)者認為，內化反應和激活效應是分離的。最近Beutler等證實(shí)，具有特異性的抗TLR4多克隆抗體具有擬內毒素的活性，從而認為LPS 并非必須經(jīng)過(guò)內化才可誘發(fā)信號轉導效應。Kitchens等證實(shí)，mCD14介導的LPS內化的動(dòng)力學(xué)主要受LPS聚集體大小的影響，而與各種細胞對LPS的不同反應無(wú)關(guān)。

LPS內化到中性粒細胞和單核-巨噬細胞中后可以經(jīng)過(guò)脫?；ザ拘?，而且在LBP和CD14參與下，其內化的速度會(huì )大大加快。Kitchens等采取配體聚合作用和LPS誘導信號轉導效應對CD14依賴(lài)性LPS內化動(dòng)力學(xué)的影響進(jìn)行分析。他們在人體單核細胞THP-1細胞株和小鼠巨噬細胞株中進(jìn)行了兩個(gè)彼此獨立的研究，證實(shí)LPS 的內化初速度和內化的程度會(huì )隨LPS聚集體增大而增加，在LBP參與下，大的LPS聚集體的內化速度極其快速，在1min內，70%的細胞結合LPS發(fā)生內化，而小的LPS聚集體的內化速度較大的LPS聚集體和單體LPS明顯減慢。

在無(wú)LBP存在時(shí)，單體LPS與sCD14形成復合物參與內化效應。小的LPS聚集體與mCD14結合后內化速度很慢，在1min內，與細胞結合的LPS為5%；相反，起初為聚集狀態(tài)對LPS 的刺激潛能沒(méi)有影響或僅存在較小的影響。以前的研究證實(shí)，LPS 誘導信號反應可能會(huì )影響LPS在細胞內運輸和加工。

有人證實(shí)，C3H/HeN（內毒素反應正常小鼠品系）和C3H/HeJ（內毒素反應低下小鼠品系）小鼠的腹腔巨噬細胞內化類(lèi)似，說(shuō)明兩者內化不存在差異，推-翻了既往認為C3H/HeJ小鼠品系的單核-巨噬細胞內化和攝取LPS有缺陷的結論。

另外，用LPS預先刺激THP-1后，對LPS的內化能力無(wú)任何影響。LPS 特異性抑制劑LA-14-PP（為脂質(zhì)A的同系物，congener）預先暴露于巨噬細胞可以抑制細胞的激活效應，但對內化動(dòng)力學(xué)無(wú)任何影響。由此可見(jiàn)，在這些細胞中，LPS由特定的機制完成其內化反應，其動(dòng)力學(xué)主要依賴(lài)于LPS呈遞到細胞的物理狀態(tài)。

Kitchens等對轉染CD14 cDNA的THP-1細胞和正常人類(lèi)單核細胞進(jìn)行了LPS內化的起始途徑研究。他們將這些細胞暴露到低張性介質(zhì)中，發(fā)現細胞的包被小窩結構消失，同時(shí)能夠阻止125Ⅰ標記轉鐵蛋白的內化。但是隨后的實(shí)驗則顯示無(wú)法抑制CD14介導的3H單體LPS和LPS聚集體的內化效應。

通過(guò)金免疫電子顯微鏡技術(shù)觀(guān)察到，結合CD14的LPS主要存在于非包被結構中，這些結構大多數為小管內陷（tubular invaginations）、胞內小管（intracellular tubules）及液泡（vacuoles）。使用雙色激光共焦點(diǎn)顯微鏡（two-colorlaser confocal microscope）技術(shù)發(fā)現，經(jīng)得克薩斯紅標記的LPS和硼聯(lián)吡咯甲烷（borondipyrromethane ，BODIPY）標記的轉鐵蛋白內化到細胞內的不同位置上，即使延長(cháng)細胞培育時(shí)間也未發(fā)現顏色重疊現象。

相反，在THP-1轉化細胞株上，有LDL受體的跨膜區片段、胞質(zhì)區片段和CD14的融合蛋白質(zhì)分子表達，LPS則大部分結合到包被小窩結構上，與胞內轉鐵蛋白共定位在細胞內，表現出顏色重疊現象。依賴(lài)CD14的內化活動(dòng)主要通過(guò)非包被結構以質(zhì)膜內陷方式指導LPS進(jìn)入小泡內，而這種小泡不同于轉鐵蛋白內化的早期內體結構。只有小部分LPS進(jìn)入到包被小窩中。

說(shuō)明不同的物質(zhì)狀態(tài)內化途徑存在著(zhù)差異，受體的結構也影響配體內化到達的目的地。LPS形成聚集體會(huì )大大增強其內化活動(dòng)，加速進(jìn)入非網(wǎng)格蛋白介導的途徑。