在凝膠法中,經(jīng)常使用的方法就包括試管法。
那在凝膠法中,試管法的使用方法是怎么樣的呢?
首先需要把供試品和鱟試劑等量加入試管中,輕搖晃使其充分混勻,再將該試管置于水浴中靜置,取出后再觀(guān)察該試管的凝膠是否形成。試驗時(shí),需要作試驗管、陽(yáng)性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管共4種,來(lái)作對照試驗。
1.試驗管
需要取出0.1ml的樣本和0.1ml的鱟試劑。水、注射液等一般樣本在試驗前是不需要進(jìn)行處理的,但是如果血液、腹腔滲出液等其他液體就必須在試驗前就進(jìn)行處理,因為這些樣本可能存在鱟試驗法反應的抑制物。所用的鱟試劑需要在試驗前就對其以標準內毒素進(jìn)行校準,且是可以進(jìn)行試驗的。
2.陽(yáng)性對照管
分別取出0.1ml的標準內毒素和0.1ml的鱟試劑,在使用標準內毒素是應以WHO標準品進(jìn)行校準標定。在實(shí)驗中應用的內毒素濃度需要根據鱟試劑的靈敏度來(lái)確定,一般來(lái)說(shuō),范圍在1~5 ng/ ml即可。
3.陰性對照管
只需取0.1ml的無(wú)熱原水和0.1ml的鱟試劑即可。
4.抑制對照管
需要取0.1ml的供試品和0.1ml的標準內毒素和0.2ml的鱟試劑。
上述四管均放入37℃孵育1~2小時(shí)觀(guān)察結果。如形成凝膠堅固,試管倒轉180度不變形,則記為(++);如混濁度和粘滯性明顯增加,呈膠體狀,但傾斜試管時(shí)變形,則記為(+);如液體流動(dòng)自如,透明無(wú)變化或稍混濁,有少量顆粒細絮片狀物,則記為(-)。
以上對照的4支試管需要在37℃的環(huán)境中靜置1~2個(gè)小時(shí),再對試管進(jìn)行觀(guān)察,以此來(lái)得出結果。如果試管中形成的凝膠是凝固的,且將試管翻轉180度都不會(huì )變形時(shí),則該試管被記為(++);但是如果試管出現了混濁的情況而且試管內還有粘滯性的情況,整體是呈膠體狀的,將試管傾斜時(shí)液體也會(huì )呈傾斜,則記為(+),如果整個(gè)試管的液體是非常流動(dòng)的,且試管內部呈透明色或者只有輕微混濁,且出現了些許顆粒細絮物,則記為(-)。
如果供試品中出現了抑制物,可以把供試品進(jìn)行處理,比如將其進(jìn)行稀釋?zhuān)蛘哂闷渌椒▽⒁种莆锴宄?,再重新進(jìn)行檢測。如果這些方法都沒(méi)有效果的話(huà),還可以采取其他細菌內毒素檢測方法,比如家兔法(Rabbit pyrogen test)。