鱟試驗法在檢測前時(shí)應做什么？

鱟試驗法（鱟變形細胞溶解物試驗）是第一個(gè)被美國作為檢測細菌內毒素的法定方法的，美國還將此法納入了美國藥典第20版（1980）中，并對該法進(jìn)行了非常詳盡的介紹。慢慢地，也有許多國家也將鱟試驗法作為檢測細菌內毒素的法定方法?，F在就以美國為例子，來(lái)詳細闡明鱟試驗法。

美國食品藥品管理局（FDA）有這樣一條準則，即只要是給人類(lèi)使用的藥品、生物制劑、醫療器械等產(chǎn)品最后一定要使用鱟試驗法進(jìn)行細菌內毒素檢測，只有檢測過(guò)關(guān)的產(chǎn)品才能得到美國食品藥品管理局的承認。

那鱟試驗法作為檢測細菌內毒素的法定方法，在進(jìn)行試驗檢測前應該做些什么呢？

首先，需要對鱟試劑的靈敏度進(jìn)行檢測。

不同的實(shí)驗室對鱟試劑的操作肯定會(huì )出現不同的差異，所以檢測人員在進(jìn)行檢測前必須要對同一批次的鱟試劑以及同一批次的內毒素作稀釋度試驗。一般來(lái)說(shuō)只需要4~8個(gè)批次試驗即可，然后再以2倍的倍比稀釋來(lái)選取終點(diǎn)范圍值作鱟試驗法。

終點(diǎn)的細菌內毒素含量用ng/ml進(jìn)行表示，接著(zhù)將其換算成log值，最后再來(lái)計算標準差，即SD值。如果出現了4個(gè)批次的稀釋度的標準差值都小于或者等于標準差值99%的限度值，那么該方法是可以進(jìn)行使用的。但是，如果標準差值有8個(gè)稀釋度的標準差超過(guò)99%的上限值，那么該方法就會(huì )因為變異較大而不能使用，必須要在重新試驗前找出不可用的原因再進(jìn)行糾正。

假如實(shí)驗室最終通過(guò)了上面出現異常的變異試驗，接下來(lái)就應該按照一系列濃度的參考標準內毒素（RSE）或對照標準內毒素（CSE）來(lái)檢測鱟試劑的靈敏度，若最終鱟試劑的靈敏度差異沒(méi)有超過(guò)標定值的2倍稀釋?zhuān)亲罱K鱟試劑的靈敏度是可行的。

其次，要對鱟試劑進(jìn)行抑制與增強試驗。

將一種藥物與水中的一系列同種內毒素濃度進(jìn)行比較，其中該藥物含有不同的標準內毒素（靈敏度以鱟試劑標定），待檢測結果出來(lái)后，再比較標準系列的內毒素檢測結果和藥物中的內毒素檢測量，如果兩者的差異結果沒(méi)有超過(guò)2倍的稀釋濃度，則認為該藥物有抑制或增強現象。

要注意的是，如果該藥物成分較為恒定，則在檢測時(shí)只需檢測該藥物的最高和最-低濃度就可以了，但是如果藥物的濃度都有抑制或者增強的作用，就必須每一種濃度都要進(jìn)行抑制或增強試驗。所有法定的藥物檢測都必須在沒(méi)有稀釋或在適當稀釋后再進(jìn)行檢測，且稀釋倍數不能超過(guò)最大有效稀釋倍數，否則其中的內毒素經(jīng)稀釋后將會(huì )出現濃度過(guò)低而不被鱟試驗法檢出的現象。