鱟試驗法中藥物與醫療器械的熱原允許含量問(wèn)題

盡管鱟試驗應用于許多領(lǐng)域的內毒素檢測，確實(shí)取得了許多成績(jì)，解決了不少實(shí)際問(wèn)題。但仍存在不少問(wèn)題，本文主要講解藥物與醫療器械的熱原允許含量問(wèn)題。

由于很小劑量的內毒素即能引起機體產(chǎn)生一系列生物效應及病理效應，而許多藥物（包括大輸液、靜脈注射劑、口服藥物、放射性同位素、各類(lèi)生物制劑），在其原料、制備過(guò)程及制備后的各個(gè)環(huán)節，或多或少地受到內毒素污染。各類(lèi)醫療器械由于消毒不嚴格（內毒素需120℃4小時(shí)才能*破壞）亦可受到內毒素的污染。所以檢測藥物及醫療器械內毒素的含量，以便有效地采取控制內毒素的含量的措施，使顯得具有重要的實(shí)際意義。對此問(wèn)題盡管?chē)鴥韧饨M織了許多人力物力進(jìn)行研究，并提出了許多有參考價(jià)值的意見(jiàn)，但國內外許多專(zhuān)家、廠(chǎng)家對此仍有甚多不同的意見(jiàn)。

1.藥物方面

藥物內毒素的允許含量是多少？其根據是什么？目前對此問(wèn)題仍未有一個(gè)滿(mǎn)意的回答。以人類(lèi)內毒素允許接受限-量作為藥物內毒素允許含量的參考較為適宜。而發(fā)熱為機體對內毒素反應最為敏感的現象之一，且發(fā)熱亦最易判斷，因此可將藥物發(fā)熱的閾值劑量作為內毒素允許含量的上限。

早在1961年Keene等即觀(guān)察到30ng /kg從衰敗沙雷氏菌提純的內毒素為引起人發(fā)熱的闞值點(diǎn)，所以對此種內毒素，閾值劑量即為30ng/kg，人類(lèi)應用30ng/kg以下是安全的。

1980年1月18日美國食品藥物管理局起草了“鱟試驗法定作為人、獸用藥及醫療器械終產(chǎn)品試驗準則"，并規定對于大多數藥物（不包括大輸液及鞘內注射劑），以重量/公斤（人體重）計算，如產(chǎn)品內毒素含量≤0.5ng/kg，則此產(chǎn)品可以允許出廠(chǎng)，但是沒(méi)有明確的數據支持此規定。為此Pearson等應用流產(chǎn)沙門(mén)氏菌、福氏痢疾桿菌、衰敗沙雷氏菌、綠膿菌、克氏桿菌等的內毒素測定了其對于家兔的閾值劑量值。事實(shí)上，家兔與人體內毒素的反應較為一致，家兔比人對內毒素更為敏感，因此試驗結果是確實(shí)，而可應用于人。這些細菌對內毒素的閾值劑量值分別為:

流產(chǎn)沙門(mén)氏菌內毒素：稍大于1.0ng/kg；

福氏痢疾桿菌內毒素：2.0ng/kg；

衰敗沙雷氏菌內毒素：15ng/kg；

綠膿桿菌內毒素：370ng/kg；

參考標準內毒為1.43ng/kg。從這些結果來(lái)看，細菌內毒素的閾值劑量均為1.0ng/kg以上。

在1977～1979年間，上述作者檢查了530371份制備過(guò)程中的半成品及終產(chǎn)品的內毒素含量，內毒素為0.05~0.2ng/ml的有489份，＞0.2ng/ ml有70份。在內毒素含量為0.05～0.2ng/ml的489份標本中，僅有13例家兔熱原試驗法為(+)，占3 %，內毒素含量＞0.2ng/ml的70份標本中，僅8份家兔熱原試驗法為(+)，占11%。因此，對于大多數藥物（不包括大輸液和鞘內注射液），1ng/ml為人可接受的內毒素上限值，以0.1ng/ml作為這些藥物內毒素的允許含量有較高的保險系數<安全系數為10）。

1980年對17家國際藥廠(chǎng)生產(chǎn)的藥品應用家兔熱原試驗及鱟試驗法進(jìn)行了研究，以考察大輸液內毒某的允許含量。67份內毒素含量為50~200pg/ml的檢品鱟試驗法均為(-)，家兔熱原試驗法(-)的有66份，占98.5%；家兔熱原試驗法(+)者1份，僅占1.5 %；18份內毒素含量＞200pg/ml的檢品，17份家兔熱原試驗法(-)，占94%；家兔熱原試驗法(+)者僅1份，占69%。因此內毒素含量、鱟試驗法及家兔熱原試驗法三者間在內毒素＜200pg/ml時(shí)有平行的關(guān)系，因而將100pg/ml（相當于1.0ng/kg）作為靜脈大輸液內毒素的允許含量是安全的。

2.醫療器械內毒素的允許含量

BMD于1977年11月4日明確指出，鱟試驗法應作為醫療器械內毒素檢測的試定方法。此后，HIMA （Health Industry minufactures Association，保健工業(yè)工廠(chǎng)聯(lián)合會(huì )）組織了一個(gè)合作研究，由生物制品管理局(BOB)下屬的生物測試分局及幾個(gè)工廠(chǎng)的試驗室參加。研究結果推薦0.1ng/ml（10ml/k g）作為醫療器械內毒素的允許含量。對于接觸腦脊液的醫療器械，內毒素的允許含量為0.04ng/ml，因內毒素進(jìn)入腦脊液中容易引起毒性反應。