內毒素與鱟試劑的反應原理

鱟系海產(chǎn)動(dòng)物，生物學(xué)分類(lèi)上屬節肢動(dòng)物門(mén)肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細胞（amoebocyte）。這種變形細胞中含有能被內毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白，因此，內毒素檢測LT法（鱟變形細胞溶解物試驗）的機理即是內毒素通過(guò)激活C因子、B因子、前凝固酶，而使可凝固蛋白變成凝固蛋白（肉眼可見(jiàn)的凝膠），從而可以半定量及定量地測知內毒素的含量（圖1）。

日本學(xué)者在對可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎上，發(fā)現內毒素激活的凝固酶的作用點(diǎn)為可凝固蛋白的第18（Arg）和19（Ghr）間的肽健，以及第46（Arg）和47 （G1y）間的肽鍵，而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結構均為-G1y-Arg，提出此酶的作用有特異性（圖2）。產(chǎn)色基質(zhì)內毒素檢測法即是據此原理而設計的。

一般地講，內毒素與鱟試劑的反應是非常特異的，因此，LT法的假陽(yáng)性極少。從革法蘭氏陽(yáng)性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑，但其活性比內毒素低1000~ 400000倍。

近來(lái)發(fā)現一種新的合成抗癌劑羧甲基（1→3）-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應。其反應原理是：鱟試劑中含有一種稱(chēng)為G因子的物質(zhì)，此抗癌劑能激活鱟試劑中的G因子，而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白，從而形成凝膠（圖2）。至此凝血酶、凝血激酶，Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等，亦可凝固鱟試劑而引起假陽(yáng)性反應。但用氯仿處理此等物質(zhì)（浸取3～4小時(shí)）可以除去這些物質(zhì)，從而可避免發(fā)生假陽(yáng)性反應。

哺乳類(lèi)動(dòng)物血漿中含一種酯酶，它對內毒素有降解及脫毒的作用，故用LT法檢測血漿中的內毒素易受此種物質(zhì)的影響，而造成假陰性結果。為了避免此等因素的影響，在試驗前血漿需經(jīng)過(guò)特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿，即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過(guò)濾法。我們及其它的一些工作者認為稀釋加熱法簡(jiǎn)便易行，效果較好。

在鱟血液中，還有一種稱(chēng)之為抗LPS因子（Anti - LPS - factor，ALF）的蛋白物質(zhì)，分子量約為15KDa，為一種鱟血抗凝劑，對LPS介導的LT反應有直接的抑制作用。ALF可抑制LPS對LT反應的初始.階段。因此在制備鱟試劑時(shí)，應將此物質(zhì)清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ （o.o2M）可改善鱟試劑的質(zhì)量，提高敏感性約100倍。