鱟試劑在細菌內毒素檢查法中的使用方法

一、鱟試劑在細菌內毒素檢查法中的正確使用

內毒素檢查法結果準確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關(guān)性很大^[1]，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關(guān)。所以，一定要嚴格執行鱟試劑的質(zhì)量標準，規范使用鱟試劑。

（一）保證所使用鱟試劑的質(zhì)量

鱟試劑的質(zhì)量主要表現在其靈敏度、自凝時(shí)間與成膠狀態(tài)三個(gè)方面:靈敏度穩定；自凝時(shí)間不低于24h^[2]；具有一定的緩沖能力與合適的pH；反應后即形成堅實(shí)凝膠，將成膠安瓿翻轉180°而不會(huì )被破壞。而質(zhì)量稍差的鱟試劑存放一定時(shí)間后（如半年）其靈敏度可能發(fā)生變化，而靈敏度的改變會(huì )使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發(fā)生變化^[3]。因此，需選擇具有國家頒發(fā)的批準文號，質(zhì)量穩定的鱟試劑。

（二）對鱟試劑靈敏度進(jìn)行監測性復核

由于不同廠(chǎng)家鱟試劑質(zhì)量不盡相同，即便是相同廠(chǎng)家不同批號的鱟試劑也有差異，這便導致鱟試劑靈敏度復核值與標示值不盡一致，因此鱟試劑的復核值對檢測結果有顯著(zhù)影響^[4]。每使用新批號鱟試劑時(shí)應復核其靈敏度；對留樣鱟試劑自生產(chǎn)之日起，每6個(gè)月進(jìn)行一次靈敏度檢測，其靈敏度在有效期內應符合規定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標準規定及適當的貯存條件下，3年內其靈敏度變化不大，是穩定的。建議可適當延長(cháng)其有效期^[5，6]。因此，對鱟試劑靈敏度進(jìn)行監測性復核有利于確保實(shí)驗的準確性。

（三）使用過(guò)程正確操作

選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過(guò)程中尤為重要。在操作過(guò)程中要注意以下幾點(diǎn):

1. 實(shí)驗室要求潔凈、無(wú)塵埃流通；檢驗人員同時(shí)注意衛生的保持。在整個(gè)使用操作過(guò)程中應防止微生物的污染，例如空氣的流動(dòng)，人員的口沫、汗液污染等。

2. 鱟試劑開(kāi)啟、溶解和配制時(shí)應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。

3. 鱟試劑中含有多種蛋白質(zhì)，用力振搖會(huì )產(chǎn)生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測的準確性，所以在整個(gè)操作過(guò)程中都要輕力以避免因過(guò)分震動(dòng)而引起的誤差。

4. 量取和加樣反應物時(shí)，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。

5. 生成凝膠的最適pH值為6~-8，對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液（5%，10%）等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時(shí)，尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品，應考慮供試品的pH值^[5]。

6. 使用時(shí)要嚴格控制溫度和時(shí)間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時(shí)反應已開(kāi)始，并在一定的溫度范圍內，反應溫度越高，反應速率越大；保溫時(shí)間的增長(cháng)，也會(huì )提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽(yáng)性的發(fā)生^[7]，導致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時(shí)間。

7. 保持實(shí)驗器具的潔凈。每次檢驗完畢，應及時(shí)將玻璃器具允分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設定的溫度后開(kāi)始計時(shí)，十烤至少1h^[8]。也可用其他經(jīng)確證不十擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h，用無(wú)熱原水沖洗，70℃干燥備用。

【參考文獻】

[1] 梁蘋(píng),蔡紅.鱟試劑靈敏度對細菌內毒素檢查的影響.華西藥學(xué)雜志,1999,14(3):204-204.

[2] 衛生部.部標準《鱟試劑》修訂稿. WS1-364(B-123)-91.

[3]張紅霞,陳慧,馬金剛.影響鱟試劑靈敏度測定結果因素的分析.中國藥師,2007,10(8):825-826.

[4] 程義琳,吳蕙玲.鱟試劑靈敏度對檢測結果的影響.中國藥師,2005,8(4): 344-345.

[5] 陳引秀.鱟試劑靈敏度穩定性的考察.海峽藥學(xué),2004,16(3): 83-84.

[6] 金華.鱟試劑靈敏度穩定性觀(guān)察.醫學(xué)理論與實(shí)踐，2004，17(1):84-84.

[7]黃冬,房判石.鱟試劑法檢測細菌內毒素假陽(yáng)性原因淺析.首都醫藥,2002,9(5): 53-54.

[8]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標準操作規范.北京:中國醫藥科技.