凝膠法是一種基于鱟試劑中的多個(gè)酶蛋白在模擬的生理環(huán)境下進(jìn)行的反應，所以在反應過(guò)程中會(huì )受到很多生化因素的影響。此外，由于內毒素本身的特性決定了容易被吸附和集聚，所以采用凝膠法進(jìn)行細菌內毒素檢查時(shí)只有很少的非腸道用藥沒(méi)有干擾可直接檢查，大部分藥物存在干擾。因此，消除干擾因素的影響對于使用鱟試劑凝膠法檢查細菌內毒素顯得十分必要。

一、凝膠法干擾類(lèi)型

凝膠法鱟試劑與內毒素反應受諸多因素干擾，主要有二大類(lèi)：抑制型干擾、增強型干擾。在進(jìn)行細菌內毒素檢查時(shí)，當供試品含有的內毒素濃度≥2倍檢測試劑的靈敏度，但檢測結果仍為陰性時(shí)，即為抑制型干擾，抑制型干擾的結果表現為“假陰性"；當供試品含有的內毒素濃度低于檢測試劑靈敏度的1/2，但檢測結果仍為陽(yáng)性時(shí)，即為增強型干擾，增強型干擾的結果表現為“假陽(yáng)性"。

二、凝膠法干擾機制

（一）抑制型干擾

1、pH的影響

鱟試劑與內毒素的反應是一個(gè)復雜的酶促反應，因此其反應的介質(zhì)要求有合適的pH，最佳 pH范圍為6~8。為保證反應介質(zhì)合適的pH，鱟試劑必須具有一定的pH緩沖能力。但有些檢品本身要求在酸性或堿性的介質(zhì)中保存，且自身也具有一定的pH緩沖能力，對這類(lèi)檢品進(jìn)行細菌內毒素檢查時(shí)，鱟試劑的pH緩沖能力就不足以使反應介質(zhì)的pH緩沖到最佳范圍，會(huì )使反應受到干擾，通常表現為抑制作用。

2、內毒素修飾

內毒素是一個(gè)具有親水，疏水兩個(gè)區域的兩性分子，這種結構使內毒素分子間或內毒素分子與檢品中成分結合形成微室，內毒素的分散性是由脂質(zhì)A形成高分子聚合物的功能和多糖與陽(yáng)離子靜電引力決定的，當內毒素分子的聚集增加，內毒素的鱟反應性和熱原性都顯著(zhù)下降，通常檢品中離子強度的較大提高會(huì )引起內毒素的聚集和回收率降低。

3、容器效應

內毒素稀釋液貯存一段時(shí)間后會(huì )被破壞而失活，即使經(jīng)充分的旋渦混合也不能恢復，其中可能有多種干擾因素，但容器效應是其中一個(gè)因素。

容器效應與接觸內毒素稀釋液的容器材質(zhì)有關(guān)，主要表現管壁對內毒素的吸附，聚丙烯材質(zhì)還會(huì )對脂多糖復合物( LPS)產(chǎn)生深度抑制。血液透析器上存在鱟試驗反應物質(zhì)(LAL-Reactive Ma-terial ,LAL-RM )，凡經(jīng)過(guò)銅銨人造絲透析膜的制品，均存在使鱟試驗陽(yáng)性，但不是內毒素的物質(zhì)。

另外稀釋管洗滌后殘留的洗滌劑，也會(huì )形成微室，影響內毒素的分散。由于熱原是Gˉ菌細胞壁的內毒素，是含有膦酸鏈的脂多糖，普遍存在于自然水和自來(lái)水中，所有器具的處理是否恰當，直接影響試驗結果。用清潔液浸泡處理過(guò)的器具與未用清潔液處理的器具用鱟法檢測內毒素的結果差異明顯，用清潔液處理的器具可除去一些外源性?xún)榷舅?/span>，未用清潔液處理的器具雖然也經(jīng)過(guò)干烤滅活，但器具上吸附著(zhù)的細菌死亡后也可釋放出內毒素，造成鱟試驗假陽(yáng)性反應結果。

4、金屬離子的影響

鱟試劑中含有保持靈敏度而必需的單價(jià)和二價(jià)離子，其中二價(jià)離子對鱟反應和內毒素分散都起著(zhù)重要作用，Ca²⁺ 、Mg²⁺離子濃度的不適宜會(huì )抑制或增強鱟反應，但許多原因都會(huì )引起二價(jià)離子的不充足，從而抑制鱟試劑與內毒素反應的能力，比如某些藥物中，常加入有機絡(luò )合劑用來(lái)絡(luò )合重金屬離子起穩定作用，肝素鈉、檸檬酸鈉等抗凝劑都會(huì )絡(luò )合鈣離子抑制鱟試驗。

5、蛋白質(zhì)或酶的修飾

凝膠現象是基于一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大作用產(chǎn)生的，絲氨酸蛋白酶可以被氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或專(zhuān)一失活劑所滅活，這些都會(huì )引起抑制，乙醇對蛋白質(zhì)有變性作用，因而要限制其在樣品中含量。

（二）增強型干擾

鱟試劑與內毒素和葡聚糖可以共同反應，且存在內毒素與葡聚糖共同作用時(shí)，鱟試劑的凝膠反應比對單一物質(zhì)作用更迅速、更劇烈。這些葡聚糖等物質(zhì)并不象內毒素一樣具有致熱性，迄今為止的研究未表明其對人體有害，但一旦受到葡聚糖的輕微污染，就使得一些藥品雖然內毒素含量并未超過(guò)規定限值，也會(huì )使內毒素檢查呈現"假陽(yáng)性"，易被誤判為不合格。

含糖大輸液與普通鱟試劑的凝膠試驗呈較高的陽(yáng)性反應，而且糖濃度越高、裝量越大，陽(yáng)性反應率越高，葉良君等認為葡萄糖原料中含有微量的(1-3)-B-D-葡聚糖，以及輸液的制備工藝，如制水時(shí)自來(lái)水和過(guò)濾時(shí)中性濾紙與微孔混合纖維素膜帶入的(1-3)-B-D-葡聚糖及其類(lèi)似物的污染，通過(guò)β-葡聚糖激活普通鱟試劑中的G因子而發(fā)生旁路反應，引起凝集反應而出現假陽(yáng)性結果。含有絲氫酸蛋白酶的生物制品也會(huì )產(chǎn)生類(lèi)似內毒素的鱟反應，胰酶在一定條件下就具有反應性，加熱處理可滅活胰酶，然后再作鱟試驗分析能真正消除這種"假陽(yáng)性"反應。