一、鱟試劑靈敏度的復核

為了保證檢查細菌內毒素結果的準確性，用于實(shí)驗的鱟試劑應首先核對靈敏度。因為實(shí)際工作中，發(fā)現鱟試劑均符合藥典規定標準前提下，由于生產(chǎn)廠(chǎng)家不同，部分鱟試劑的實(shí)測靈敏度與標示值有差異而導致檢測同一檢品時(shí)，用相同標示值的鱟試劑，出現不同結果。鱟試劑靈敏度的復核是使用該鱟試劑的前提。中國藥典(2000版)在靈敏度復核項下規定,只有當實(shí)測值λc在0.5λ~2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)時(shí)，方可用于細菌內毒素檢查，并以λ為該批試劑的靈敏度，同時(shí)要求所用鱟試劑的靈敏度須小于供試品的內毒素限值，因此靈敏度的準確與否直接關(guān)系到判斷結果的正誤，應盡量選用測定值與標示值一致(λc =λb)的鱟試劑。有報道，用符合藥典規定的靈敏度標示值相同的鱟試劑檢測同一檢品，結果因鱟試劑實(shí)測值與標示值間存在差異而出現了兩種*不同的結果。因而先核對靈敏度可避免因鱟試劑本身造成的判斷失誤。

二、供試品的稀釋

在取樣品時(shí)，要熟悉中國藥典的內容，不能直接取大輸液原液0.1ml進(jìn)行檢查，這是排除干擾因素的簡(jiǎn)單有效的方法。因藥典已明確規定實(shí)驗中鱟試劑的靈敏度不超過(guò)0.5EU/ml，根據供試品的稀釋公式:

供試品稀釋倍數=L/λ

L:供試品的內毒素*

λ:鱟試劑靈敏度的標示值(EU/ml)。

故檢測大輸液均應稀釋后才能進(jìn)行實(shí)驗，如選用更高靈敏度的鱟試劑，則應增加樣品的稀釋倍數。稀釋用的細菌內毒素檢查用水藥典作了規定。在4h內不得與鱟試劑產(chǎn)生凝集反應。如果直接用供試品原液實(shí)驗，就會(huì )使供試品的內毒素要求提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml 以下，這樣，根據目前大輸液的生產(chǎn)和貯藏條件，有些就會(huì )達不到，鱟法檢出的陽(yáng)性率會(huì )提高，兔法復核的機遇也將增多，勢必會(huì )浪費人力物力。

以前細菌內毒素的限值是按照熱原檢查法所需的家兔劑量計算的，由于家兔劑量往往高于人用最大劑量的幾倍甚至幾十倍，勢必造成對產(chǎn)品內毒素要求過(guò)于嚴格，使很多合格產(chǎn)品被判為不合格產(chǎn)品或使藥品生產(chǎn)成本增加，所以在USP和EP中，相繼采用人用最大劑量來(lái)計算藥品細菌內毒素的限值。如注射用頭孢噻肟鈉按中國藥典(1995版)規定的熱原劑量計算其細菌內毒素限值，與USP的限值要求相差4倍，而用最大劑量計算則兩者十分接近。

三、混合液的pH值

供試液與益試劑混合液的pH值對鱟實(shí)驗的影響較大，根據國內外資料的報道，實(shí)驗的最適pH為6.25~7.25才能形成最佳凝膠。鱟試劑本身具有一定的緩沖能力。但pH值過(guò)大或過(guò)小均可抑制鱟試劑與細菌內毒素的反應，其原因可能是pH值過(guò)大或過(guò)小均可破壞極微量的內毒素。

四、保溫溫度

溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大，保溫溫度在25~40℃之間，隨著(zhù)溫度的升高，鱟試劑的靈敏度亦增大，在40~46℃之間，溫度對益試劑的靈敏度無(wú)明顯影響，達到49℃或更高溫度時(shí)，則會(huì )破壞鱟試劑。故應嚴格按照藥典的要求，溫度控制在(37士1)℃之間，才可獲得理想的結果。

五、振動(dòng)的影響

鱟試劑與細菌內毒素形成的凝膠受到振動(dòng)后易變形而誤判為陰性。因此，在鱟實(shí)驗過(guò)程中，不宜進(jìn)行容易引起試管振動(dòng)的實(shí)驗操作，實(shí)驗用的試管架的眼孔直徑應與安瓿或試管直徑相接近，避免安瓿或試管左右晃動(dòng)。水浴箱要放置在固定不易受到振動(dòng)的地方，保溫過(guò)程中不可隨時(shí)取出觀(guān)察。

六、所用器皿的影響

所用器皿均應*洗凈和滅菌，實(shí)驗用器皿均應充分洗滌并沖洗干凈，特別是接觸酸堿或用洗衣粉、洗液等洗滌后，更應沖洗干凈，以免殘留物破壞極微量的內毒素。滅菌應按藥典中的有關(guān)方法處理，防止引入外源性?xún)榷舅?。如有條件的話(huà)可用合格的細菌內毒素快檢盒。

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本文節選自：《細菌內毒素檢測中問(wèn)題的研究》，文章作者：岳麗娜。如有侵權，請聯(lián)系刪除，謝謝！