發(fā)布時(shí)間: 2022-12-19 點(diǎn)擊次數: 558次
動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑兼有動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑和終點(diǎn)法顯色基質(zhì)鱟試劑的優(yōu)點(diǎn)。不需要凝固蛋白原形成凝膠,根據顯色反應來(lái)準確定量細菌內毒素,抗干擾能力強,特別適用于生物樣本的檢測,如疫苗、抗體、蛋白質(zhì)、核酸、臨床樣本等的內毒素分析。
動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑的質(zhì)量主要表現于其靈敏度、自凝時(shí)間與成膠狀態(tài)三個(gè)方面:靈敏度穩定;自凝時(shí)間不低于24h;具有一定的緩沖能力與合適的pH;反應后即形成堅實(shí)凝膠,將成膠安瓿翻轉180°而不會(huì )被破壞。而質(zhì)量稍差的鱟試劑存放一定時(shí)間后(如半年)其靈敏度可能發(fā)生變化,而靈敏度的改變會(huì )使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發(fā)生變化。
動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑在操作過(guò)程中要注意以下幾點(diǎn):
1、實(shí)驗室要求潔凈、無(wú)塵埃流通;檢驗人員同時(shí)注意衛生的保持。在整個(gè)使用操作過(guò)程中應防止微生物的污染,例如空氣的流動(dòng),人員的口沫、汗液污染等。
2、鱟試劑開(kāi)啟、溶解和配制時(shí)應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中,避免鱟試劑外損。
3、鱟試劑中含有多種蛋白質(zhì),用力振搖會(huì )產(chǎn)生氣泡,一旦起泡難以消除,而影響檢測的準確性,所以在整個(gè)操作過(guò)程中都要輕力以避免因過(guò)分震動(dòng)而引起的誤差。
4、量取和加樣反應物時(shí),一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。
5、生成凝膠的最適pH值為6~8,對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液,不需考慮供試液的pH值,而檢查其他制劑時(shí),尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品,應考慮供試品的pH值。
6、使用時(shí)要嚴格控制溫度和時(shí)間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時(shí)反應已開(kāi)始,并在一定的溫度范圍內,反應溫度越高,反應速率越大;保溫時(shí)間的增長(cháng),也會(huì )提高鱟試劑的靈敏度,增加假陽(yáng)性的發(fā)生,導致較大誤差。因此,要注意控制溫度的變化和保溫時(shí)間。
7、保持實(shí)驗器具的潔凈。每次檢驗完畢,應及時(shí)將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理,待烤箱溫度升至設定的溫度后開(kāi)始計時(shí),干烤至少1h。也可用其他經(jīng)確證不干擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h,用無(wú)熱原水沖洗,70℃干燥備用。