為什么稀釋內毒素標準品需要旋渦振蕩？

《美國藥典》中的細菌內毒素檢查法中規定，應使用國家參考標準內毒素（RSE），復溶后應旋渦振蕩不少于20min；復溶后的原液于冰箱保存不超過(guò)14d，再次使用前要強烈地旋渦振蕩不少于5min；隨后的每一步稀釋前被稀釋液也要旋渦振蕩不少于1min；不能使用保存的稀釋液。美國鱟試劑廠(chǎng)家供應的工作標準內毒素（CSE）在使用說(shuō)明書(shū)中都對內毒素的復溶和稀釋有使用旋渦混合器震蕩的要求。同樣，世界衛生組織及各國藥典中的細菌內毒素檢查法也對標準內毒素的稀釋有震蕩混合的要求。

為什么對標準內毒素的稀釋有如此特殊的要求呢?這與內毒素的化學(xué)成分與結構有關(guān)。

LPS是具有疏水和親水雙重活性的兩性分子；多糖鏈具有親水性；脂肪鏈具有疏水性。內毒素溶于水或稀釋時(shí)，LPS的親水性糖鏈朝向水和水接觸，而疏水性的脂質(zhì)鏈部分卻背向水，這樣，LPS的疏水端自然聚集成團，形成直徑約為0.1μm的雙層殼狀或泡囊。脂質(zhì)A藏于聚集團的內部或貼附于器皿上，而脂質(zhì)A是激活堂試劑的主要部分，在水溶液中，由于其疏水性而不能與鱟試劑充分接觸，造成檢測到的內毒素含量偏低。若是檢測前利用旋渦裝置充分振蕩，可以使貼附于器皿上的內毒素分子脫落，使聚集團的相對分子質(zhì)量下降。經(jīng)振蕩后的內毒素溶液重新靜置一段時(shí)間后，內毒素仍然會(huì )聚集成團或貼附于器皿壁上，所以樣品存放一段時(shí)間后，在使用前仍需充分振蕩。

實(shí)驗表明，同一批號的國家參考標準內毒素在稀釋時(shí)震蕩與否結果相差很大。若采用旋渦震蕩法稀釋內毒素，效價(jià)測定的結果與國際參考標準內毒素（IS）基本一致；若不經(jīng)振蕩稀釋?zhuān)瑒t測定的效價(jià)要比國際參考標準內毒素低50%～75%。所以，內毒素在稀釋時(shí)一定要充分振蕩，才能得到所標示的效價(jià)。在實(shí)施1995年版的《中國藥典》前，我國相當部分的鱟試劑在標定靈敏度時(shí)，沒(méi)采用振蕩稀釋內毒素的方法，導致標定的靈敏度高于實(shí)際值100%~300%。也就是說(shuō)，鱟試劑用戶(hù)在使用比標示靈敏度高1～3倍的堂試劑做細菌內毒素檢查。