內毒素檢測時(shí)，血液前處理方法的注意點(diǎn)有哪些？

1、在進(jìn)行血中內毒素測定時(shí)，要注意選擇方法和試劑。

2、血漿或血清制備

作為臨床上常用樣本主要為血漿，其使用率占95%以上，因此作為體液主要部分血漿的制備就顯得十分重要。據Das報道：內毒素一般除了游離狀態(tài)外，還大量附著(zhù)在血小板上，因此用含有大量血小板的血漿作為樣品更為合適。在制備人血漿或動(dòng)物血漿時(shí)，目前國外為了防止細胞的破壞多采用低溫分離，使用含有大量血小板的血漿樣品，即在4℃1000gx10分鐘分離條件，或在無(wú)低溫離心機時(shí)用3000gx40秒分離條件。切不可在常溫下進(jìn)行高速、長(cháng)時(shí)間分離，另外，在分離血漿或血清時(shí)，要避免細菌的污染。

血清的制備：用不加抗凝劑的注射器采血轉入離心管中，在冰水浴中放置30分鐘，4℃條件下、1000xg、10分鐘進(jìn)行離心分離血清。

血漿或血清分離后，若暫時(shí)不用，可在-80℃冰凍保存，并在1個(gè)月以?xún)仁褂?。注意為了避免吸附內毒?/span>，請使用玻璃制試管保存。

3、抗凝劑種類(lèi)及影響

在制備血漿時(shí)由于加入一定的抗凝劑，因此抗凝劑的種類(lèi)和加入量對于回收率都有很大的影響，一般常用抗凝劑主要有：肝素，枸櫞酸鈉及EDTA等，其中以肝素的使用最多。然而，我們知道大量的肝素會(huì )對內毒素反應有干擾作用，尤其對稀釋加熱法和氯仿提取法將使回收率下降，而對PCA法影響較少，因此在制備血漿時(shí)肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。