一般來(lái)說(shuō)由于血液的組成比較復雜,其中的許多物質(zhì)尤其是高等動(dòng)物的血漿或血清對TAL(LAL)試劑與內毒素反應很強的干擾作用。因此當我們對這類(lèi)樣品的內毒素進(jìn)行測定時(shí),必須將其中的干擾物質(zhì)除去后,方可進(jìn)行檢測。
目前作為血漿中的干擾物質(zhì)主要有:各種蛋白酶抑制劑、內毒素結合蛋白以及纖溶酶原抑制劑等物質(zhì),對于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽鏈。因此在測定前排除這些干擾物是十分必要的。
除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法主要有以下幾種,現分別介紹如下:
(1)稀釋加熱法:血漿用溶解水進(jìn)行3~10倍稀釋,然后在37 ~ 100℃水中進(jìn)行加熱處理。保溫時(shí)間一般在5~10分鐘;
(2)氯仿提取法:血漿加等量的氯仿振動(dòng)3小時(shí),然后取上層進(jìn)行檢測;
(3)乙-醚處理法:血漿加入乙-醚處理并在40℃保溫將乙-醚去除;
(4)三氟代乙酸法:血漿中加入乙酸調節pH4.0后用K2HPO4調節pH到7~7.5;
(5)表面活性劑處理法:同稀釋加熱法一樣,只是將稀釋用水改為表面活性劑;
(6)凝膠過(guò)濾法;
(7)堿性處理法:血漿用0.2NNaOH37℃保溫10分鐘后用HCl中和;
(8)高氯酸法(PCA)或新高氯酸法(New PCA);
(9)Beads法:將吸附內毒素的特殊樹(shù)脂放入血漿中,取出后,加入LAL試劑進(jìn)行反應。
在這些方法中,常用的主要有:氯仿提取法、稀釋加熱法以及高氯酸(PCA)法和新高氯酸(New PCA)法,其中前兩種方法由于內毒素回收率﹑假陽(yáng)性等問(wèn)題的存在,因此在測定時(shí)需要探討,而PCA法(New PCA法),由于添加內毒素的回收率好,目前在日本主要用于臨床前處理。