發(fā)布時(shí)間: 2022-08-09 點(diǎn)擊次數: 3270次
動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑是通過(guò)檢測反應混合物的濁度到達某一預先設定的吸光度所需要的反應時(shí)間,或是檢測濁度增加速度來(lái)檢測內毒素的方法。在適宜的條件下(溫度,pH值及無(wú)干擾物質(zhì)),細菌內毒素激活C因子,引起一系列酶促反應,使鱟試劑產(chǎn)生凝集反應形成凝膠。隨著(zhù)凝膠的形成,反應液的吸光度(OD值,濁度)增加,OD值增加的速度與內毒素濃度成正相關(guān)。換言之,OD值上升某一預設限值(啟動(dòng)OD)所需要的時(shí)間(定義為啟動(dòng)時(shí)間)與內毒素濃度成負相關(guān),啟動(dòng)時(shí)間的對數與內毒素濃度的對數成線(xiàn)性關(guān)系,據此,可以定量供試品的內毒素濃度。
動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑操作方法如下:
1、動(dòng)態(tài)光度測定儀器的設定:
預熱儀器,設置溫育溫度為37℃,設置模板及程序。設定讀板波長(cháng)為340nm、630nm,設定動(dòng)力學(xué)參數:讀板90-120分鐘,每讀板間隔30-150s。
2、內毒素標準溶液配制
?。?)標準曲線(xiàn)所采用的內毒素濃度可以為2至10倍稀釋的系列(如0.5,0.25,0.125,0.0625EU/mL或10,1,0.1,0.01EU/mL))。
?。?)取內毒素工作標準品1支,用砂輪沿安瓿頸部劃痕,開(kāi)啟,加入適量(建議在0.5mL-1.2mL之間)細菌內毒素檢查用水,置旋渦混合器上劇烈振搖5分鐘。
?。?)將上述內毒素溶液進(jìn)一步用細菌內毒素檢查用水稀釋成所需濃度,每稀釋一步均應在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘。稀釋的內毒素溶液靜置時(shí)間超過(guò)10分鐘,用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘,配置時(shí)間超過(guò)4小時(shí)的內毒素溶液應丟棄。
3、陰性對照為細菌內毒素檢查用水。
4、動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑的溶解:按標示量加細菌內毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑*溶解。注意不要用旋渦混合器劇烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內使用。若采用多道移液器,將溶解的鱟試劑轉移到除熱原加樣槽,并輕輕搖勻。
5、實(shí)驗操作:
?。?)取除熱原微板,在各孔中分別加入100μL細菌內毒素檢查用水、內毒素標準溶液,或供試品。
?。?)將微板放置于鱟試儀中,37℃溫育10分鐘。
?。?)溫育結束,用移液器或多道移液器加入100μL鱟試劑(避免產(chǎn)生氣泡!),中速振搖10秒混勻,在340nm波長(cháng)處,每30秒(到60秒)讀一次,讀板120分鐘。