各國法定檢測內毒素的方法

美國首先將LT法（鱟變形細胞溶解物試驗）作為檢測內毒素的法定方法。在美國藥典第20版（1980）的細菌內每素一項中對LT法亦進(jìn)行了詳細的介紹。繼美國以后，許多國家（特別是歐洲國家）紛紛仿效，亦已將LT法作為檢測內毒素的法定方法?，F以美國為例，來(lái)說(shuō)明這種法定的LT法。

美國食品藥品管理局（FDA）對廠(chǎng)家提出了一條準則。FDA認為對于應用于人類(lèi)的藥物、生物制劑、獸用藥物及醫療器械必須將LT法作為法定的終產(chǎn)品（end product）內毒素檢測方法，廠(chǎng)家只有遵循這個(gè)原則并按介紹的方法操作后，其產(chǎn)品才能得到FDA的承認。

LT法作為法定的內毒素檢測方法，在進(jìn)行測定時(shí)必需作①測定鱟試劑的敏感性；②抑制與增強試驗。

1.鱟試劑的敏感性

在鱟試驗的操作過(guò)程中，各個(gè)實(shí)驗室之間必定有差異。檢測人員必須應用同一批鱟試劑及同一批內毒素作4~8個(gè)稀釋度的試驗，以2倍倍比稀釋以便取得適宜的終點(diǎn)范圍作LT。終點(diǎn)內毒素量應以ng/ m1表示，然后換算成log值，計算標準差（SD）。如果4個(gè)稀釋度的SD值小于或等于SD值的99%限值，則此方法是可用的。如SD超過(guò)比值，則應采用8個(gè)稀釋度的試驗，計算新的SD值。此時(shí)，如SD值仍超過(guò)8個(gè)稀釋度SD的99%上限值，則此方法由于變異太大不能采用。在重新試驗前應找出原因并進(jìn)行糾正。

如實(shí)驗室通過(guò)了上述變異試驗，則應以一系列濃度的參考標準內毒素（RSE）或對照標準內毒素（CSE）檢查鱟試劑的敏感性，如果鱟試劑的敏感性差異不超過(guò)標定值的2倍稀釋?zhuān)瑒t認為是滿(mǎn)意的。

2.抑制與增強試驗

一種藥物含不同濃度的標準內毒素（敏感性以鱟試劑標定》，然后與水中的一系列同種內毒素濃度進(jìn)行比較。標準系列的內毒素檢測結果與藥物中的內毒素檢測含量進(jìn)行比較，其差異不應超過(guò)兩倍稀釋濃度。原則說(shuō)明此種藥物有抑制或增強現象。

由不同濃度不同活性要素組成，而其它成分相對恒定的藥物，只需測最高和低濃度即可，如果每種濃度均表明有抑制或增強，則每種濃度均需進(jìn)行抑制/增強試驗。

所有法定的藥物檢測均需在未稀釋或在適當稀釋后測定。稀釋倍數不能超過(guò)最大有效稀釋（Maxium Valid Dilution，MVD），否則其中的內毒素經(jīng)稀釋后濃度過(guò)低而不被LT法檢出。

如果藥物表明有抑制或增強現象，則應服從RT法。此時(shí)，RT法仍將是檢測藥物內毒素含量的適宜方法。至少應檢測3個(gè)生產(chǎn)批次終產(chǎn)品的抑制及增強試驗。如果藥物的加工制造過(guò)程改變，或藥物的配方或藥物中某種特殊要素的來(lái)源改變，則每種藥物至少要對3種單位重復測定抑制/增強試驗。如鱟試劑的生產(chǎn)或鱟試劑批號更變時(shí)，至少每種藥品要對1種單位進(jìn)行重復測定。