目前,市面上僅有兩種新型的細菌內毒素檢測方法,分別是重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC)。
重組鱟試劑
重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC) 檢測方法的區別是什么?
1 反應原理
左側為重組鱟試劑(rCR) 右側為重組C因子(rFC)
2 檢測方法
01 重組鱟試劑(rCR)使用動(dòng)態(tài)顯色法
重組鱟試劑(rCR)不需要更換方法和設備,使用現有的細菌內毒素檢測方法(動(dòng)態(tài)顯色法)和設備就能進(jìn)行檢測和分析。
PKF型細菌內毒素定量檢測系統
02 重組C因子(rFC)使用終點(diǎn)熒光法
重組C因子(rFC)以終點(diǎn)法定量測定熒光底物的單步酶促反應裂解產(chǎn)物來(lái)量化細菌內毒素,需要特定熒光酶標儀,經(jīng)孵育后才可進(jìn)行檢測。
3 復溶過(guò)程
01 重組鱟試劑(rCR)只需單步復溶
重組鱟試劑(rCR)只需單步復溶,檢測試劑用量50μL,完成檢測僅需15分鐘,既節省了檢測成本,又提高了檢測效率。
02 重組C因子(rFC)需預孵化
重組C因子(rFC)則較為復雜。檢測前,三種試劑酶溶液、緩沖液、底物溶解比例為 1:4:5,且必須經(jīng)過(guò)預孵化步驟(過(guò)程不低于10分鐘),檢測試劑用量100μL,降低了檢測效率,檢測成本也大大增加。
4 檢測樣品
如圖所示,適合性/一致性研究測試了多個(gè)成品、水、緩沖液等樣品,得出重組鱟試劑(rCR)比重組C因子(rFC)有較低的不干擾稀釋倍數。
注:綠色的相對回收率表示有效的回收率,紅色的回收率是無(wú)效的(超出可接受范圍)
基于以上數據得出結論,重組鱟試劑(rCR)適合于廣泛的產(chǎn)品檢測??杀刃匝芯繙y試了多種來(lái)源的細菌內毒素和水樣,證實(shí)應用重組鱟試劑(rCR)檢測具有較好的相對回收率。
5 總結
新的內毒素檢測方法已經(jīng)是大勢所趨。從檢測原理、方法、前期準備、檢測樣品及檢測時(shí)間等方面來(lái)看,重組鱟試劑(rCR)較重組C因子(rFC)具有以下優(yōu)勢:
基因重組鱟試劑 | 動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑 | 動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑 | 凝膠法鱟試劑 | 凝膠法快速檢測試劑 |